細胞培養における一般的な試薬
動物の細胞や組織を体外で培養する場合、生育に必要なさまざまな栄養素や、体外で細胞をよりよく成長させるために必要なさまざまな試薬を供給する必要があります。 今回は、細胞培養プロセスで使用される試薬の成分とその働きについて簡単に紹介します。
1. 細胞培養液組成
(1).基本培地
一般的な基礎培地には主に MEM、DMEM、RPMI が含まれ、主にグルコース、アミノ酸、水、微量元素、重炭酸ナトリウムなどの緩衝系を提供します。
●グルタミン
細胞の成長に必要な必須アミノ酸であり、タンパク質合成や核酸代謝に関与します。
●フェノールレッド指示薬
一般的に使用される酸塩基指示薬で、酸性の場合は黄色、中性の場合は赤色、アルカリ性の場合は紫色を示します。 フェノールレッドは培地のpH値の指標として使用されます。
●炭酸・PH緩衝システム
生理学的 pH 緩衝システム。 細胞代謝中の酸生成により、培地中の HCO3- は徐々に消費されるため、pH を一定の範囲に維持するには適時に CO2 を補充する必要があります。
(2).動物血清
2% ～ 20% の血清を基礎培地に加えて完全培地を形成します。 血清は細胞の成長に必要な基本的な栄養素を提供するだけでなく、成長因子、ホルモン、微量元素、イオンなどの細胞の代謝に関与する重要な成分も含んでいます。
(3)。 抗生物質
培養プロセス中の細胞の汚染を防ぐために、通常、ペニシリンとストレプトマイシンの混合物、つまり二重抗体が完全培地に添加されます。 ペニシリンは主にグラム陽性菌に対して効果があり、ストレプトマイシンは多くのグラム陰性菌に対して効果があります。 。
2. トリプシン-EDTA
トリプシンは細胞間のタンパク質を加水分解し、細胞を分離します。 EDTA は毒性の低い化学キレート剤であり、接着細胞に対して個別の影響を与えます。 両者を組み合わせて使用すると、より細胞の分散効率が高くなります。 この段階は消化細胞と呼ばれます。 細胞が異なれば、使用時の温度、時間、トリプシンの濃度についての要件も異なります。 消化が不十分だと細胞が消化されず、過剰な消化は細胞にダメージを与えます。 培地中の血清はトリプシンの活性を低下させる可能性があるため、通常は完全培地を使用して細胞の消化を停止させます。
3. PBSバッファー
PBS は、塩バランスと調整可能な pH 緩衝効果を備えたリン酸緩衝生理食塩水です。 通常、細胞を洗浄し、細胞の浸透圧を維持するために使用されます。
4. ジメチルスルホキシド (DMSO)
重要な浸透性細胞保護剤であり、細胞凍結保存液の重要な成分です。 細胞の凍結保存プロセス中に、DMSOは細胞膜を素早く貫通して細胞に入り、凝固点を下げ、凍結プロセスを遅らせ、細胞内のイオン濃度を増加させ、細胞内の氷晶の形成を減少させ、細胞の凍結速度を低下させることができます。 ダメージ。
5. マイコプラズマ阻害剤
マイコプラズマ汚染は、細胞培養プロセスにおける一般的な汚染源です。 ただし、マイコプラズマ阻害剤を使用すると、汚染の初期段階で細胞液中のマイコプラズマを除去できるため、実験を継続できます。
6. トリパンブルー色素
細胞膜の完全性を検出するために一般的に使用される生物学的染色試薬。 細胞膜の完全性が失われ、透過性が増加するため、死細胞はトリパンブルーによって青色に染色されますが、生細胞は細胞膜が無傷であり、トリパンブルーが細胞に侵入するのを防ぐため、染色されません。 顕微鏡下で生細胞と死細胞を細胞の色で区別できるため、生細胞の計数に便利です。