図1固相ポリペプチドの概略図
1963年、メリフィールドは固相ペプチド合成法を提案しました。これにより、ペプチド研究のための広いスペースが開かれ、分子生物学やその他の分野の開発が大幅に促進されました。 このため、メリフィールドは1984年にノーベル化学賞を受賞しました。
1990年代以降、ポリペプチド合成技術が徐々に成熟するにつれて、ますます多くの活性ポリペプチドが開発され、医学、食品、化粧品、農業、畜産などの分野で広く適用されてきました。 固相ポリペプチド合成法も広く使用されています。 この論文では、ペプチドの固相合成と開裂は、固相ペプチド合成反応器に従って紹介されています。
図2完全な固相ポリペプチド合成リアクターのフィールドアプリケーション
I.固相ペプチド合成
私。餌
固相合成に樹脂を添加し、膨潤のためにDCMを添加し、排出し、洗浄のためにDMFを添加し、洗浄後、スタンバイのために排出します。
ii。結露
アミノ酸を一定量のDMFに溶解し、活性化のための縮合剤を添加し、固相シンセサイザーに入れ、DMFを反応濃度に補充し、反応のために撹拌します。
iii。保護基の除去カイザー試薬で反応度を検出しました。反応が完了した後、溶媒をポンプで排出し、続いてDMFで洗浄した。保護基を除去するためにPIP/DMF溶液を加えた。反応度はカイザー試薬で検出した。反応が完了した後、溶媒をポンプで排出し、続いてDMF洗浄を行い、そこで次のアミノ酸を加えた。
iv。凝縮サイクル
樹脂配列に従ってアミノ酸を順次接続し、「脱保護-洗浄-活性化アミノ酸-供給凝縮-洗浄」のステップに従って凝縮サイクル操作を実行し、アミノ酸配列に従って残りのn個のアミノ酸の凝縮を完了する。
私。放電
合成後、樹脂をIPAおよびDCMでクロスウォッシュして、樹脂の収縮を完了し、ステンレス鋼トレイに排出しました。
ii。樹脂乾燥
室温の真空乾燥オーブンで樹脂を乾燥させ、乾燥後に秤量し、収率を計算します。
iii。有機廃液回収、集中処理。
iv。清算
オペレーターは、操作後、時間内にサイトをクリアする必要があります。
I.樹脂のひび割れ
私。液体の準備
溶解液の成分比率に応じて溶解液を調製し、あらかじめ冷凍庫に入れて冷蔵保存してください。
ii。餌
反応ケトルにペプチド樹脂を加え、予冷したクラッキング液を加え、攪拌して反応させる。
iii。放電
その反応溶液をクラッキングの後方に排出し、濾過して樹脂を除去し、TFAで洗浄する。
iv。集中
その分解した液体をロータリーエバポレーターに移し、室温で少量に濃縮します。
v。降水量
濃縮した反応溶液を予冷したメチルtert-ブチルエーテル（エーテルと略記）に注ぎ、撹拌して大量の固体を沈殿させる。
vi。遠心分離
濁った液体を遠心分離し、予冷したエーテルで洗浄します。
私。粗ペプチド乾燥
精製した粗ペプチドを真空乾燥オーブンに移し、室温で乾燥させた。
ii。有機廃液回収、集中処理。
iii。清算
オペレーターは、操作後、時間内にサイトをクリアする必要があります。
図3完全なセットの固相ポリペプチド切断ケトル
実際の製造工程では、分解された粗ペプチドも精製、濃縮、ろ過、凍結乾燥などの工程を経る必要がありますが、本稿では詳しく説明しません。
現在、より短いペプチド鎖の合成プロセスは比較的成熟していますが、より高分子量でより長いペプチド鎖を持つタンパク質物質の場合、固相合成技術には一定の制限があり、一方で、高コストや 副反応を伴う。 したがって、ペプチドの固相合成に基づいて、新しい方法を見つける必要があります。