増幅方法:
等温蛍光 PCR: 等温蛍光 PCR では、DNA 増幅は一定の温度で発生します。 これは、プロセス全体を通じて反応が単一の一定温度で起こることを意味します。
リアルタイム PCR: リアルタイム PCR は定量的 PCR (qPCR) とも呼ばれ、サーマル サイクル プロセスを使用します。 これには、変性、アニーリング、および伸張ステップを含む複数の温度サイクルが含まれます。 これらの温度サイクルは通常、サーマル サイクラー マシンによって制御されます。
温度管理：
等温蛍光 PCR: 名前が示すように、等温蛍光 PCR は反応中に一定温度 (通常は約 60 ～ 65℃) を維持します。 これにより、リアルタイム PCR と比較して反応に必要な機器が簡素化されます。
リアルタイム PCR: リアルタイム PCR には、温度が異なるレベル間で繰り返し変化するサーマル サイクルが含まれます (例: 約 95℃ で変性、約 55 ～ 65℃ でアニーリング、約 72℃ で伸長)。 これには、正確な温度制御を備えたサーマルサイクラーが必要です。
検出方法:
等温蛍光 PCR: 蛍光検出は等温蛍光 PCR とリアルタイム PCR の両方で使用されます。 ただし、等温蛍光 PCR では、通常、異なる温度ステップ間を循環する必要なく、蛍光シグナルが連続的に検出されます。
リアルタイム PCR: リアルタイム PCR では、温度変化の各サイクル後 (通常はアニーリング/伸長ステップ後) に蛍光シグナルが測定されます。 これにより、熱サイクルプロセス中に発生する DNA 増幅のリアルタイムモニタリングが可能になります。
アプリケーション:
等温蛍光 PCR: この技術は、簡単さとスピードが重要な迅速なポイントオブケア検査などの特定の用途に適しています。 特定の DNA 配列の定性的検出に使用できます。
リアルタイム PCR: リアルタイム PCR は、DNA の定性分析と定量分析の両方に広く使用されています。 感度が高く、サンプル中の DNA の初期量を測定できるため、遺伝子発現解析、ウイルス量の定量化、遺伝子型解析などのアプリケーションに役立ちます。
要約すると、等温蛍光 PCR とリアルタイム PCR の主な違いは、温度制御と増幅方法です。 等温蛍光 PCR は反応全体を通じて一定の温度を維持し、より単純で迅速なアプリケーションに適しています。一方、リアルタイム PCR は熱サイクルを伴い、広範囲の定量的および定性的 DNA 分析アプリケーションに使用されます。